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RT-PCR試劑盒的兩種檢測模式介紹
點擊次數(shù):615 更新時間:2022-12-01
  RT-PCR試劑盒具有敏感性高、特異性強、快速等特點,目前廣泛應(yīng)用于農(nóng)獸藥、真菌殘留檢測,該方法從加樣、洗板、顯色到讀數(shù)步驟繁多,其中任何一步控制不好都可能影響檢測結(jié)果的準確性。
 
  今天要為大家介紹的是RT-PCR試劑盒的兩種檢測模式:
 
  1、雙雜交探針模式(FRET):FRET探針又稱雙雜交探針,F(xiàn)RET探針由兩條相鄰探針組成,在一條探針端標記FAM熒光基團,另一探針端標記Red640熒光基團。當(dāng)復(fù)性時,探針結(jié)合在模板上,F(xiàn)AM基團和Red640基團相鄰,激發(fā)FAM產(chǎn)生的熒光,作為Red640基團的激發(fā)光被吸收,使Red640發(fā)出波長為640的熒光。當(dāng)變性時,探針游離,兩基團距離遠,不能產(chǎn)生640波長的熒光。由于FRET探針是靠近發(fā)光,所以檢測信號是實時信號,非累積信號。
 
  2、交探針模式(Beacon):分子信標是一種呈發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,因此標記在一端的熒光基團與標記在另一端的淬滅基團緊緊靠近。熒光基團被激發(fā)后產(chǎn)生的光子被淬滅劑淬滅,由熒光基團產(chǎn)生的能量以紅外而不是可見光形式釋放出來。分子信標的莖環(huán)結(jié)構(gòu)中,環(huán)一般為15-30個核苷酸長,并與目標序列互補;莖一般5-7個核苷酸長,并相互配對形成莖的結(jié)構(gòu)。熒光基團標記在探針的一端,而淬滅劑則標記在另一端。在復(fù)性溫度下,因為模板不存在時形成莖環(huán)結(jié)構(gòu),當(dāng)加熱變性會互補配對的莖環(huán)雙鏈解開,如果有模板存在環(huán)序列將與模板配對。與模板配對后,分子信標將成鏈狀而非發(fā)夾狀,使得熒光基團與淬滅劑分開。當(dāng)熒光基團被激發(fā)時,因淬滅作用被解除,發(fā)出激發(fā)光子。由于是酶切作用的存在,分子信標也是積累熒光。
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